ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的關鍵酶,其催化產(chǎn)生的乙酰輔酶A可用于脂肪酸合成和碳鏈延長、黃酮類物質合成、氨基酸合成等。
測定原理:
ACL在ATP和輔酶A存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰輔酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm測定NADH減少速率,計算ACL活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
樣本的前處理:
1、培養(yǎng)細胞:先收集或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。